SPE/HPLC方法法測(cè)定奶粉中香蘭素

更新時(shí)間：2012-07-27

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張景然，岳中花，喬艷芬（博納艾杰爾應(yīng)用部）

1. 前言

香蘭素亦稱香草素、香草醛等，學(xué)名為3-甲氧基-4-羥基苯甲醛，根據(jù)歐盟專家委員會(huì)2000年2月24日?qǐng)?bào)道，大劑量可導(dǎo)致頭痛，惡心，嘔吐，呼吸困難，甚至損傷肝腎功能。

樣品組分	結(jié)構(gòu)式
香蘭素

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB2760-2011）規(guī)定，較大嬰兒和幼兒配方食品中香蘭素zui大使用量為5mg/100mL，其中100mL以即食食品計(jì)，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)按照沖調(diào)比例折算成配方食品中的使用量；嬰幼兒谷類輔助食品中可以使用香蘭素，zui大使用量為7mg/100g，其中100g以即食食品計(jì)；凡使用范圍涵蓋0至6個(gè)月嬰幼兒配方食品不得添加任何食用香料。

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中只規(guī)定了限值，未有檢測(cè)方法。本實(shí)驗(yàn)使用天津博納艾杰爾科技有限公司的Cleanert^® PAX固相萃取小柱和Venusil^®XBP C18（L）液相色譜柱，建立了一種奶粉中香蘭素的檢測(cè)方法，經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，該方法簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確度高。

2. 實(shí)驗(yàn)方法

2.1實(shí)驗(yàn)試劑和耗材

l 水（pH=4.5）；取100mL水，用乙酸調(diào)節(jié)pH至4.5；

l 2%乙酸鉛溶液：稱取乙酸鉛2g，加水稀釋并定容至100mL；

l 5%氨水溶液：取氨水溶液5mL，加水稀釋并定容至100mL；

l 5%酸化甲醇：取甲酸5mL，加甲醇95mL混勻；

l 香蘭素儲(chǔ)備液（1mg/mL）：準(zhǔn)確稱取香蘭素標(biāo)準(zhǔn)品10mg，加水稀釋并定容至10mL；

l SPE柱：Cleanert^® PAX （60mg/3mL），使用前分別用3mL甲醇和3mL水活化；

l HPLC柱：Venusil^®XBP C18 （L）（5μm 150Å 4.6*150mm）；

l 針式過(guò)濾器：親水型 PTFE （0.45μm，13mm）。

2.2 儀器及設(shè)備

l LC-10F液相色譜系統(tǒng)；

l Qdaura^®卓睿全自動(dòng)固相萃取儀；

l 高速離心機(jī) （轉(zhuǎn)子50mL*6）；

l 氮吹儀；

l 12位固相萃取裝置。

2.3試樣處理

準(zhǔn)確稱取奶粉試樣1g（至0.01g）于50mL離心管中，加入pH=4.5的水溶液5mL，混勻超聲提取5min，加2%乙酸鉛溶液2mL，混勻后靜置2min，8000r/min離心10min；取上清液用5%氨水溶液調(diào)節(jié)pH至中性；將上清液全部加樣至活化好的Cleanert^® PAX小柱，然后分別用3mL 5%氨水溶液和3mL甲醇淋洗小柱，棄去淋洗液；用3mL 5%酸化甲醇洗脫（以上固相萃取操作通過(guò)Qdaura^®卓睿全自動(dòng)固相萃取儀完成），收集洗脫液于30℃下氮?dú)獯蹈桑?/span>1mL流動(dòng)相重新溶解，過(guò)濾，待測(cè)。

2.4液相色譜條件

色譜柱：Venusil^®XBP-C18（L），5um 150Å 4.6*150mm；

流動(dòng)相：A（0.02mol/L的磷酸二氫鉀溶液，磷酸調(diào)節(jié)pH=4.0）：B（乙腈）= 90：10；

流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：20μL；波長(zhǎng)：276nm；柱溫：30℃。

3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1線性關(guān)系和檢出限

量取一定量香蘭素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，分別用水稀釋至1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、25μg/mL和50μg/mL，按照3.3檢測(cè)條件依次進(jìn)樣，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，結(jié)果見表1：

表1 香蘭素標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限

標(biāo)準(zhǔn)曲線方程	相關(guān)系數(shù)	檢出限（S/N>3）
Y=86.443X+36.907	0.9998	1μg/g

3.2準(zhǔn)確度

表2. 5μg/g添加回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果

	平行1	平行2	平行3	平均回收率	RSD
回收率	89.03%	94.30%	90.67%	91.33%	2.70%

表3. 25μg/g添加回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果

	平行1	平行2	平行3	平均回收率	RSD
回收率	85.08%	87.85%	83.59%	85.51%	2.16%

4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)論

實(shí)驗(yàn)表明，Cleanert^® PAX和Venusil^®XBP C18（L）可以用于奶粉中香蘭素的檢測(cè)，本方法簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確度高。

5. 實(shí)驗(yàn)圖譜

圖1 奶粉空白譜圖

圖2. 5μg/g添加譜圖

圖3. 1μg/g標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖

6. 訂貨信息

名稱	規(guī)格	訂貨號(hào)
分析型液相色譜儀	10ml/min，等度系統(tǒng)，200-400nm雙波長(zhǎng)檢測(cè)器	FL-LC010
分析型色譜柱溫箱	室溫+5-50℃，箱內(nèi)兩對(duì)夾套	CC-100-T
Qdaura^®卓睿全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)	4通道	SPE-40
甲醇	色譜純，4*4L/箱	AH230-4
乙腈	色譜純，4*4L/箱	AH015-4
Cleanert^® PAX SPE柱	60mg/3ml，50支/盒	AX0603
Venusil^®XBP C18（L）HPLC柱	5μm 150Å 4.6*150mm	VX952505-L
保護(hù)柱芯	4.6*10mm，4/包	VX950105-L
保護(hù)柱套	適用于4.6*10mm的保護(hù)柱芯	CH-100
親水PTFE針式過(guò)濾器	0.45μm，13mm，100/包	AS081345
一次性注射器	2ml無(wú)針頭，100支/包	LZSQ-2ML
溶劑過(guò)濾器	1L	AM3100
1.5mL樣品瓶	短螺紋透明帶書寫處，100/PK	1109-0519
1.5mL樣品瓶蓋	100/PK	0915-1819
12樣品瓶	螺紋透明，100/PK	1509-1657
12mL樣品瓶蓋	100/PK	1515-1748
微孔濾膜（MCM）	50mm，0.45μm，100片/包	AM015045
微孔濾膜（Nylon）	50mm，0.45μm，100片/包	AM025045
離心機(jī)	zui大轉(zhuǎn)速10000r/min	TGL-10B
氮吹儀	15位	NV15-G
真空固相萃取缸	12位	VM12
流速調(diào)節(jié)閥	12個(gè)/包	A81213
穿板導(dǎo)流針	12個(gè)/包	A80100
無(wú)油隔膜真空泵	1臺(tái)	A01003

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