色譜柱柱壓過高是液相色譜(HPLC/UHPLC)分析中常見的問題，可能由流動相、系統堵塞、色譜柱污染或儀器故障引起。平時我們在實驗室進行液相色譜的分析測試時，如果突然遇到色譜柱柱壓過高，需要怎么做？
 

　　01立即采取的安全措施
 

　　停止運行儀器
 

　　關閉泵和檢測器，避免持續高壓損壞系統。
 

　　佩戴防護裝備
 

　　處理高壓系統時需戴護目鏡和手套，防止液體噴濺。
 

　　02逐步排查原因及解決方法
 

　　柱壓過高的核心排查邏輯：從外到內，由簡到繁。優先排除流動相、過濾器和保護柱等外部因素，再逐步深入檢查儀器部件和色譜柱。定期維護和規范操作是預防高壓問題的關鍵。
 

　　流動相
 

　　◆有無充分脫氣？
 

　　觀察流動相瓶里是否有很多氣泡，氣泡堵塞濾頭會導致壓力升高，可重新超聲流動相或者重新配置流動相。
 

　　◆流動相是否澄清？是否分層？或者有顆粒物析出？
 

　　建議流動相使用前用濾膜過濾，一般使用0.22μm濾膜過濾有機相，0.45μm濾膜過濾水相或緩沖鹽，防止有鹽的顆粒堵塞管線或者色譜柱導致壓力升高。如看到流動相渾濁或分層，需重新配置。
 

　　如果有鹽溶液，超純水溶解緩沖鹽后，再加入有機相，加入后，需擰緊瓶蓋，大力搖勻，僅僅超聲是不夠的，需要做到充分混勻，防止水相和有機相未混勻導致的出峰異?；虿怀龇迩闆r。
 

　　斷開色譜柱，排查儀器壓力
 

　　◆卸下色譜柱，用兩通接頭連接泵與檢測器，以純甲醇/乙腈(低黏度)運行系統。
 

　　◆正常壓力：<5 MPa(不同儀器基線值可能略有差異)
 

　　◆高壓持續：說明泵、混合器、管路或檢測器堵塞，需分段檢查。
 

　　連接保護柱
 

　　◆若系統壓力正常，依次連接保護柱、色譜柱，判斷壓力升高的來源。
 

　　◆保護柱壓力高：更換保護柱柱芯，若更換了保護柱柱芯壓力仍高，說明是保護柱柱套堵了，需更換新的柱套；保護柱壓力不高，色譜柱壓力高，說明是色譜柱導致的系統壓力高，再進一步排查。
 

　　色譜柱部分
 

　　◆首先需要檢查色譜柱的規格，例如長度、內徑、填料粒徑這些參數，如果粒徑較小且內徑較小，需注意此類型色譜柱本身壓力就會偏高一些，如果遇到儀器超壓報警，關注是否是儀器耐壓上限低導致的。(ps：各個系列色譜柱維護指南、典型壓力及壓力上限可在艾杰爾飛諾美公眾號自主查詢)
 

　　◆新柱啟用，如果流動相起始比例是高比例的鹽溶液(例90%磷酸二氫鉀緩沖鹽：10%乙腈)，需先用同比例的乙腈水(例90%水：10%乙腈)過渡，防止高比例有機相立馬轉換到高比例鹽溶液造成的鹽析現象。
 

　　◆色譜柱使用一段時間后導致的壓力升高：如果柱壓緩慢升高，且伴隨峰形展寬或分叉，柱效明顯下降----篩板或柱頭堵塞；如果柱壓驟升-----填料塌陷。
 

　　一般建議反向沖洗色譜柱，使用適當溶劑梯度沖洗，嚴重污染時，可嘗試強溶劑沖洗；填料塌陷需更換色譜柱；也可反接色譜柱使用看壓力是否符合要求。(具體的沖洗流程各個色譜柱不盡相同，可在艾杰爾飛諾美公眾號自主查詢)
 

　　03其他可能原因
 

　　溫度異常
 

　　◆柱溫過低導致流動相黏度升高，壓力升高，適當提高柱溫(需參考方法要求及色譜柱耐溫上限要求)。
 

　　◆溫控模塊故障需檢修。
 

　　流速設置錯誤
 

　　檢查方法中流速是否超出色譜柱耐受范圍(如常規液相色譜柱通常≤1.5 mL/min)。
 

　　樣品殘留
 

　　未過濾樣品(0.22μm濾膜)或高濃度樣品導致柱頭污染，需加強樣品前處理。
 

　　04預防措施及日常維護
 

　　1、使用合適的保護柱，定期更換保護柱柱芯。
 

　　2、緩沖鹽流動相，色譜柱活化需先用高比例水相過渡，避免鹽析現象。
 

　　3、色譜柱沖洗及保存：常規反相柱，需先用高比例水相沖洗，再用高比例有機相沖洗，然后高比例有機相保存。需要注意清洗時，將流速設置為低于方法流速，長時間沖洗比多次沖洗的效果好。
 

　　4、利用固相萃取(Strata-X/Cleanert SPE產品)等樣品制備技術或配件(Phenex/Clarinert針頭式過濾器)，盡可能減少進入系統和色譜柱上的污染物。
 

　　5、不要讓色譜柱過載，進樣合適的樣品濃度和體積。
 

　　6、記錄壓力基線，記錄新色譜柱初始壓力，便于后續對比判斷。
 

　　下面來總結一下：
 

　　色譜柱壓力過高的一般排查順序為，先排查流動相，再連接兩通排查儀器及系統壓力，最后排查保護柱及色譜柱，同時需要查看溫度及流速的設置以及是否色譜柱規格與儀器壓力上限不合適的情況。若自行處理無效，建議聯系儀器或色譜柱廠家尋求技術支持。