白酒中16種鄰苯二甲酸酯類物質檢測整體解決方案-GC/MS法、HPLC法

更新時間：2012-11-22

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一、實驗目的

建立白酒中塑化劑的前處理和檢測方法，使用Cleanert DEHP（500mg/6mL，玻璃柱）富集白酒這類極性基質中的鄰苯二甲酸酯類物質，建立固相萃取方法，以期得到優良的加標回收率，保證檢測結果的準確性。

二、儀器及材料

材料：白酒；純化水,16種鄰苯二甲酸酯（PAEs）混標1ppm；Cleanert DEHP（500mg/6mL，玻璃柱管）；玻璃移液管；洗耳球；燒杯

儀器：Agilent GC/MS 7890-5075c，Agilent HPLC1200，氮吹儀

三、實驗過程

注意事項：實驗過程中，試劑及容器必須為玻璃，盡量避免接觸塑料制品。

甲醇和乙酸乙酯必須是進口色譜純。

3.1 溶液配制

（1）將白酒用去離子水稀釋，使其中的乙醇的含量為5%。

例如：某種白酒含酒精52%，那么取9.6mL白酒，用去離子水稀釋定容至100mL，即可得5%的酒精含量的樣品液。

（2）取1mL甲醇加入19mL去離子水，混勻，得到5%甲醇水溶液，為淋洗液。

3.2 固相萃取

活化：用玻璃移液管分別取5mL乙酸乙酯、5mL甲醇，5mL水，在重力狀態下依次過柱；

上樣：用玻璃移液管取100mL樣品液加到柱上；

淋洗：用玻璃移液管取5mL 5%甲醇/水溶液淋洗固相萃取柱。

淋洗結束之后，開啟真空泵，抽20min，抽干之后，加入2mL甲醇浸泡柱床約1min；

洗脫：用10mL乙酸乙酯洗脫固相萃取柱，收集洗脫液。

將洗脫液分別于35℃氮吹至干，用1mL甲醇定容，將溶液轉移至進樣樣品瓶，進行GC/MS或HPLC檢測，具體檢測方法參見附錄1及附錄2。

四、實驗結果及結果分析

取2份10mL含5%酒精的白酒樣品溶液，各加入1ppm鄰苯二甲酸酯類混標100μL，按照上述方法進行操作和GC/MS檢測，得到的色譜圖見圖1，回收率數據見表1.

4.1 實驗譜圖

圖1加標樣品洗脫液色譜圖（定容濃度為100ppb）

4.2 實驗數據

表1 回收率數據

化合物	保留時間/min	樣品1	樣品2
鄰苯二甲酸二甲酯	8.258	139.38%	122.06%
鄰苯二甲酸二乙酯	9.128	121.19%	138.34%
鄰苯二甲酸二異丁酯	10.889	171.77%	159.59%
鄰苯二甲酸二丁酯	11.637	176.37%	137.97%
鄰苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯	11.97	131.02%	99.47%
鄰苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯	12.728	97.79%	83.94%
鄰苯二甲酸二（2-乙氧基）乙酯	13.051	130.83%	102.72%
鄰苯二甲酸二戊酯	13.418	105.87%	66.29%
鄰苯二甲酸二己酯	15.568	87.54%	62.29%
鄰苯二甲酸丁基芐基酯	15.726	129.39%	95.98%
鄰苯二甲酸二（2-丁氧基）乙酯	17.169	164.31%	125.40%
鄰苯二甲酸二環己酯	17.843	111.14%	86.31%
鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯	18.073	105.94%	89.61%
鄰苯二甲酸二苯酯	18.207	170.57%	117.68%
鄰苯二甲酸二正辛酯	20.481	123.82%	99.88%
鄰苯二甲酸二壬酯	23.023	121.05%	97.86%

注意：鄰苯二甲酸二甲酯、鄰苯二甲酸二乙酯、鄰苯二甲酸二異丁酯、鄰苯二甲酸二丁酯是使用非常普遍的增塑劑，廣泛的存在于環境中，因而測試時十分容易造成背景過高的干擾問題。尤其需要注意的是氮吹時，使用的氮吹儀，應該是的儀器，而且必須定期用進口色譜純的乙酸乙酯清洗氮吹的針頭。

附錄1 GC/MS法檢測16種鄰苯二甲酸酯類化合物

儀器：Agilent 7890/5975c GC/MS

色譜條件：

色譜柱：DA-5MS（30m*0.25mm*0.25μm）（訂貨號：1525-3002）；

進樣口：250℃，不分流進樣；

進樣量：1μL；

程序升溫：50℃（1min）20℃/min 220℃（1min）5℃/min 280℃（4min）；

流速：1 mL/min。

質譜條件：

接口溫度：280℃；

電離方式：EI；

電離能量：70eV；

溶劑延遲：7min；

監測方式：SIM模式，監測離子見表2。

表2 16種鄰苯二甲酸酯類化合物定量離子及定性離子

序號	保留時間/min	中文名稱	英文縮寫	定量離子	輔助定性離子
1	8.258	鄰苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.128	鄰苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	10.889	鄰苯二甲酸二異丁酯	DIBP	149	223
4	11.637	鄰苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	11.97	鄰苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.728	鄰苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯	BMPP	149	251
7	13.051	鄰苯二甲酸二（2-乙氧基）乙酯	DEEP	45	72
8	13.418	鄰苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.568	鄰苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.726	鄰苯二甲酸丁基芐基酯	BBP	149	91
11	17.169	鄰苯二甲酸二（2-丁氧基）乙酯	DBEP	149	223
12	17.843	鄰苯二甲酸二環己酯	DCHP	149	167
13	18.073	鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯	DEHP	149	167
14	18.207	鄰苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.481	鄰苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.023	鄰苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

圖2 100ppb標樣色譜圖

表3 16種鄰苯二甲酸酯類化合物GC/MS檢測標準曲線表

峰序號	簡稱	標準曲線方程	R²
1	DMP	y = 63.4 * x + 444	1
2	DEP	y = 62.1 * x + 317	1
3	DIBP	y = 98.8e * x + 3230	1
4	DBP	y = 115 * x + 1400	1
5	DMEP	y = 32.2 * x + 398	0.999
6	BMPP	y = 25 * x + 45.2	1
7	DEEP	y = 14.6 * x + 305	0.995
8	DPP	y = 105 * x + 786	1
9	DHXP	y = 110 * x - 90.2	1
10	BBP	y = 45.9 * x + 3050	0.997
11	DBEP	y = 16.7 * x + 11.3	1
12	DCHP	y = 74 * x + 198	1
13	DEHP	y = 61 * x + 2050	1
14	—	y = 41.6 * x + 438	1
15	DNOP	y = 92.8 * x + 259	1
16	DNP	y = 78.7 * x + 800	0.999

結論：Agela DA-5ms氣相色譜柱能夠很好的分離16種鄰苯二甲酸酯類物質，*16種鄰苯二甲酸酯類物質的幾十ppb級含量的定量測定。由于條件所限，筆者手頭上只有16種鄰苯二甲酸酯物質，所做實驗，供大家參考。

附件2 HPLC法檢測16種鄰苯二甲酸酯類化合物

色譜柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（訂貨號：VX952505-L）

流動相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50

表4 梯度洗脫表

Time/min	A/%	B/%
0	60	40
2	50	50
10	40	60
12	30	70
20	30	70
31	0	100
40	0	100
40.01	60	40

流速：1.0 mL/min

波長：242 nm

進樣量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm）

樣品：16種鄰苯二甲酸酯

濃度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流動相A）

溶劑：正己烷 /40%流動相A

柱溫：30℃

圖3 16種鄰苯二甲酸酯標準品HPLC色譜圖（樣品濃度：25ppm）

（鄰苯二甲酸二甲酯DMP，鄰苯二甲酸二乙酯DEP，鄰苯二甲酸二正丁酯DBP，鄰苯二甲酸二辛酯DNOP，鄰苯二甲酸二苯酯，鄰苯二甲酸丁芐酯BBP，鄰苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，鄰苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，鄰苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，鄰苯二甲酸二戊酯DPP，鄰苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，鄰苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，鄰苯二甲酸二環己酯DCHP，鄰苯二甲酸二異丁酯DIBP，鄰苯二甲酸二己酯DNP，鄰苯二甲酸二壬酯DINP）

表5 16種鄰苯二甲酸酯類化合物HPLC檢測標準曲線表

峰位置	簡稱	標準曲線方程	R²
1	DMP	Y=24.99X+5.202	0.999
2	DEP	Y=17.84X+3.424	0.999
3	DBP	Y=24.21X+3.974	0.999
4	DNOP	Y=14.03X+3.658	0.998
5	鄰苯二甲酸二苯酯	Y=24.21X+3.974	0.999
6	BBP	Y=17.51X+4.972	0.997
7	DEHP	Y=17.22X+4.098	0.999
8	DMEP	Y=18.67X-0.302	0.997
9	DBEP	Y=12.66X-1.877	0.998
10	DPP	Y=14.38X+0.445	0.997
11	BMPP	Y=15.35X+0.798	0.998
12	DEEP	Y=11.46X+3.475	0.998
13	DCHP	Y=13.52X+2.67	0.998
14	DIBP	Y=9.915X+26.59	0.996
15	DNP	Y=10.61X-0.041	0.999
16	DINP	Y=9.404X+11.14	0.999

結論：Agela Venusil XBP C18-L色譜柱能夠較好的分離16種鄰苯二甲酸酯類物質，分離度較好，*LC檢測16種鄰苯二甲酸酯類物質的含量。由于條件所限，筆者手頭上只有16種鄰苯二甲酸酯物質，所做實驗，供大家參考。